2021年9月17日 · (C)shRNA 构建用于插入表达载体(如慢病毒载体)。 两个在RNAi途径的基因沉默中具有实质利害关系的是双链小干扰RNA(siRNA)和基于载体的短发夹RNA(shRNA)。虽然siRNA和shRNA都可用于蛋白沉默,但它们的作用机制有所不同(图2)。
RNA干扰是一种能特异性、选择性破坏靶基因表达的过程。介导RNA干扰效应的方法包括化学合成的双链小干扰RNA(siRNA)、基于载体的短发夹RNA(shRNA)等。虽然siRNA和shRNA可以实现相似的功能结果,但本质上是不同的分子,一起来了解一下吧~ siRNA
shRNA是一个单一的RNA分子,它自身折叠形成一个发夹结构。 像siRNA一样,它可以被设计成与特定的mRNA分子互补。 一旦shRNA被引入细胞,它就会被细胞机制处理成类似siRNA的分子,可以与目标mRNA结合并触发其降解,导致目标基因的表达减少
2023年6月7日 · shRNA的原理是,它可以被细胞内的一种酶叫做Dicer切割成两条siRNA,然后siRNA和一种蛋白叫做RISC结合,形成一个复合物。 这个复合物可以识别和目标基因的mRNA互补的序列,然后把mRNA切断,从而阻止它被翻译成蛋白质。
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[图片] shRNA发挥功能的过程相对复杂,需先将shRNA构建至表达载体,并借助质粒或病毒媒介进入细胞,在细胞内经过转录、剪切、酶切等步骤形成siRNA,进而导致基因沉默,因此shRNA的设计需要遵循以下原则: 1. shRNA靶点序列的设计和特异性验证与siRNA相同,可参考siRNA的设计步骤获得shRNA靶点序列,但 ...
其基本思路是:将siRNA对应的靶序列设计成回文结构,中间用9个不配对的碱基形成发夹结构,后面连接5个胸腺嘧啶,将靶序列克隆入病毒载体内,位于RNA聚合酶Ⅲ的启动子后,病毒经过扩增后感染细胞,就能在细胞内表达所需的siRNA,由于回文结构后面加了5个 ...
shRNA发挥功能的过程相对复杂,需先将shRNA构建至表达载体,并借助质粒或病毒媒介进入细胞,在细胞内经过转录、剪切、酶切等步骤形成siRNA,进而导致基因沉默,因此shRNA的设计需要遵循以下原则:
理论上可以,但是一方面shRNA量少,一方面shRNA是个发夹,自然没什么位置给siRNA结合。 而且它因为没有polyA,本身也不稳定,瞬间就被dicer切了。 事实上,mRNA被切断之后,也是没有polyA的3’段被降解,有polyA尾巴的部分降解慢。
shRNA是一种短小的RNA序列,能够特异性地靶向并沉默目标基因。相比之下,microRNA是一种具有多重目标作用的小RNA分子,可以通过结合多个mRNA靶标实现基因表达调控。shRNA的优势在于靶向性明确、作用效果短暂且迅速,适用于需要快速沉默特定基因的实…